LABORATOIRE DE BIOLOGIE DE LA NUTRITION

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NOTRE SAVOIR-FAIRE :
Cultures cellulaires

[Contacts : Drs Prasanthi Jegatheesan]

Le laboratoire réalise une partie de son expérimentation sur des cultures cellulaires. Nous utilisons tant des cultures primaires (hépatocytes, myotubes, macrophages) que des lignées cellulaires musculaires (C2C12), hépatiques (H4IIE) et macrophagiques (RAW : 264.7).

  • Étude sur macrophages péritonéaux de rats.
    Au laboratoire, nous réalisons en routine l’isolement de ces macrophages.

    Animaux. Ces cellules sont isolées à partir de rats SD ou de rats Zucker sains ou obèses.

    Isolement cellulaire. Les animaux sont anesthésiés puis sacrifiés par décapitation. Aprés désinfection, une courte incision abdominale est réalisée et les macrophages sont décrochés de la paroi péritonéale par injection intrapéritonéale de 20 ml de milieu de culture (Dulbecco Medium Eagle Modified) suivie d’un massage vigoureux. La suspension cellulaire est recueillie par aspiration, à la seringue.
    Après l’étape de lavage, le culot de centrifugation est mis en suspension dans du milieu de culture. Les cellules sont comptées en cellule de Malassez et leur viabilité est évaluée aprés coloration au Bleu Trypan. Les macrophages sont ensemencés à une densité de 1.106 cellules/ml sur des plaques de culture standard.
    Les macrophages sont sélectionnés par leur capacité à adhérer au support après 2h d’incubation à 37°C, sous une atmosphère air/CO2 95/5. Les cellules non adhérentes sont éliminées par 2 lavages successifs avec le milieu de culture.

    Traitement des cellules. Selon le protocole, les cellules peuvent être soumises à différents traitements tels que l’incubation avec des milieux spécifiques enrichis en pharmaconutriments (tels que l’arginine ou la glutamine) à l’issue de laquelle surnageants et lysats cellulaires sont récupérés.

    Publications récentes sur ce thème :

  • Breuillard C,, Curis E, Le PlÚnier S, Cynober L, Moinard C. Nitric oxide production by peritoneal macrophages from aged rats: A short term and direct modulation by citrulline. Biochimie. 2017 Feb;133:66-73. doi: 10.1016/j.biochi.2016.10.020. Epub 2016 Dec 7.